服務(wù)熱線
86-021-52261560
Product classification
單細(xì)胞RNA測序(scRNA-seq)作為一種高通量測序技術(shù),它允許研究者在單個細(xì)胞水平上測量基因表達(dá),揭示細(xì)胞群體內(nèi)部的異質(zhì)性,識別不同細(xì)胞類型或狀態(tài)的基因表達(dá)模式,為細(xì)胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、疾病研究和藥物發(fā)現(xiàn)等領(lǐng)域的研究提供了新的維度和深度。
單細(xì)胞RNA測序技術(shù)起始于單細(xì)胞分離,Bio-Techne單細(xì)胞柔性系統(tǒng)Pala為單細(xì)胞分選提供了快速便捷的途徑。以下實驗通過單細(xì)胞柔性分選系統(tǒng)Pala分選經(jīng)細(xì)胞活性染料及特異性熒光抗體標(biāo)記的單個活化B細(xì)胞。通過對靜息及活化B細(xì)胞基因表達(dá)分析研究活化對基因表達(dá)的影響。
實驗步驟
(1)利用mCD40L-3T3飼養(yǎng)細(xì)胞對人原代記憶B細(xì)胞活化6天。收集活化后細(xì)胞并用抗人CD27-PE抗體及細(xì)胞活性染料CellTrackerGreen進行染色。
(2)在板中加入每孔4微升裂解液,利用單細(xì)胞柔性分選系統(tǒng)Pala將PE及FITC陽性細(xì)胞分選至96孔PCR板中。細(xì)胞裂解后進行cDNA合成及RNA建庫測序。
(3)每孔中進行VH及VL抗體可變區(qū)基因特異性擴增(qPCR)。
(4)基因文庫利用Illumina Nextseq進行測序,比較活化及靜息狀態(tài)下B細(xì)胞的基因表達(dá)差異。
實驗結(jié)果
(1)單細(xì)胞分離效率:經(jīng)過擴增后,96孔中有93孔含有cDNA(97%)。
(2)單細(xì)胞驗證:Sanger測序表明所有的孔中都是單個細(xì)胞,不存在二聚體的情況。
(3)免疫球蛋白基因表達(dá):免疫球蛋白qPCR結(jié)果顯示所有所有樣品中均表達(dá)重鏈IGVH,輕鏈僅表達(dá)kappa或lambda(IGVK、IGVL)中的一種。
(4)B細(xì)胞活化相關(guān)基因表達(dá)變化:觀察到多個與B細(xì)胞活化相關(guān)的基因表達(dá)發(fā)生變化。這些基因包括但不限于CD22、CD19、BLNK、PLCγ2、IRF4、BLIMP1、XBP1、CD27、CD38和CD319。
(5)免疫球蛋白亞型表達(dá):展示了IgG、IgA以及kappa和lambda輕鏈的表達(dá)情況,這有助于了解B細(xì)胞在活化狀態(tài)下的免疫球蛋白亞型轉(zhuǎn)換。
Bio-Techne單細(xì)胞柔性分選系統(tǒng)Pala為單細(xì)胞分離和分選提供了一個輕柔、快速、易于操作平臺,可與下游的單細(xì)胞基因組分析聯(lián)合使用。
* 本文轉(zhuǎn)載自「ProteinSimple」微信公眾號
> >關(guān)于ProteinSimple:
美國納斯達(dá)克上市公司Bio-techne (Nasdaq: TECH) 集團旗下的蛋白質(zhì)分析品牌,一直致力于研發(fā)和生產(chǎn)更精準(zhǔn)、更快速、更靈敏的創(chuàng)新性蛋白質(zhì)分析工具,包括蛋白質(zhì)電荷表征、蛋白質(zhì)純度分析、蛋白質(zhì)翻譯后修飾定量檢測、蛋白質(zhì)免疫實驗如 Western 和 ELISA 定量檢測蛋白質(zhì)表達(dá)等技術(shù),幫助生物制藥、細(xì)胞治療、生物醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)等領(lǐng)域科學(xué)家解決蛋白質(zhì)分析問題,深度解析蛋白質(zhì)和疾病相互關(guān)系。
>> 關(guān)于上海昊擴:
上海昊擴科學(xué)器材有限公司成立于2019年,總部位于上海,是一家實驗室設(shè)備/耗材及分析儀器的專業(yè)服務(wù)商。公司致力于為生物、醫(yī)藥、物性檢測、化工分析、食品、工業(yè)生產(chǎn)等相關(guān)領(lǐng)域客戶提供國內(nèi)外高科技專業(yè)設(shè)備以及技術(shù)咨詢服務(wù)。2024年,上海昊擴正式與美國Bio-techne集團旗下的蛋白質(zhì)分析品牌ProteinSimple達(dá)成合作,成為其華東大區(qū)授權(quán)代理商。
Copyright © 2024 版權(quán)所有:上海昊擴科學(xué)器材有限公司 ICP備案號:滬ICP備20016915號-1 管理登陸 技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) 總流量:167696 網(wǎng)站地圖